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查士丁尼一世（拉丁语：Justinianus I；希腊语：Ιουστινιανός；全名为弗拉维·伯多禄·塞巴提乌斯·查士丁尼 Flavius Petrus Sabbatius Justinianus，约483年5月11日－565年11月14日）是东罗马帝国皇帝，他的统治时间是从527年到565年。由于他收复了许多失土，重建圣索菲亚教堂，并编纂查士丁尼法典，功不可没，因此也被称为查士丁尼大帝。

查士丁尼一世是古罗马时代末期最重要的一位统治者，他的统治期一般被看作是罗马帝国历史从古典时期迈向中古世纪的的重要过渡期。比如他于542年废除了执政官这个从罗马共和国遗留下来的官职（可能出于费用的考虑）。他还加强了皇帝作为神在地上的代表的地位，这一举动彻底破坏了罗马帝国中皇帝被视为执行长、“国家之父”，“第一公民”的形象。但历史学家普罗科匹厄斯就已经对查士丁尼一世的政策提出了深刻的批评。普罗科匹厄斯的著作是今天对查士丁尼一世统治期研究最重要的一手资料。