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民国十六年(1927年)8月1日，周士第率部参加[[南昌]]起义，任第25师师长。起义军南下广东失利后，辗转[[香港]]、[[南京]]、[[上海]]、[[西安]]、[[福建]]等地，曾参加邓演达领导的 [[ 中国国民党 ]] 临时行动委员会和[[黄埔]]革命同学会，参与策划推翻[[蒋介石]]。